A New Tech teljesen automatikus nukleinsav-kivonó és detektáló gépe

Öt erősség:
● Nukleinsav extrakciós és tisztított lépéssel konfigurált műszer
● Ultrahangos elszívó modullal konfigurált műszer
● Teljesen automatával konfigurált műszer
● Változtatható hőmérsékletű erősítéssel konfigurált műszer
● A készülék teljesen zárt reagenskészlettel van konfigurálva

1.Ki kell-e extrahálni és tisztítani a nukleinsav-detektáló reagenseket?
A nukleinsav-detektálás elve a következő: primer hatására a DNS-polimeráz segítségével láncreakciós amplifikációt hajtanak végre a templát DNS/RNS-en (amelyhez az NA reverz transzkripciója szükséges), majd a felszabaduló fluoreszcens jel mennyiségének detektálásával meghatározzák. hogy a minta tartalmazza-e a kimutatandó kórokozó nukleinsavát (DNS/RNS).

1)A nem extrahált vagy tisztított minták számos olyan összetevőt tartalmazhatnak, amelyek befolyásolják a végeredményt: nukleáz (amely feloldhatja a célnukleinsavat és téves negatívot okozhat), proteáz (amely csökkentheti a DNS polimerázt és álnegatívot okozhat), nehézfém só (ami a szintáz inaktiválásához vezet, és hamis pozitívumot okoz), túl savas vagy túl lúgos PH (ami a reakció sikertelenségét okozhatja), hiányos RNS (álnegatív reverz transzkripciós kudarchoz vezet).

2) Néhány mintát nehéz közvetlenül amplifikálni: Gram-pozitív és néhány parazita, vastag sejtfaluk és egyéb struktúráik miatt, ha nem mennek át a nukleinsav extrakciós és tisztítási folyamaton, az extrakciómentes készlet meghibásodhat. minták.

Ezért ajánlatos a nukleinsav extrakciós lépéssel konfigurált tesztkészletet vagy műszert kiválasztani.

2. Kémiai extrakció vagy fizikai ultrahangos fragmentációs extrakció?
Általánosságban elmondható, hogy a kémiai extrakciót a legtöbb előkezeléshez és tisztításhoz lehet alkalmazni.A vastag falú Gram-pozitív baktériumok és egyes paraziták esetében azonban az is előfordul, hogy a kémiai extrakcióval nem lehet hatékony nukleinsav templátokat nyerni, ami hamis negatív kimutatást eredményez.Emellett a vegyszeres extrakciónál gyakran használnak erős szereket, ha az eluálás nem alapos, könnyen erős lúg kerül a reakciórendszerbe, ami pontatlan eredményeket eredményez.

Az ultrahangos fragmentálás fizikai zúzást alkalmaz, amelyet a GeneXpert, az emberi felhasználásra szánt POCT területén vezető vállalat sikeresen alkalmazott, és abszolút előnye van egyes összetett minták (például Mycobacterium tuberculosis) nukleinsav-kivonásában.

Ezért ajánlatos olyan tesztkészletet vagy műszert választani, amely nukleinsav extrakciós lépéssel van konfigurálva.és optimális, ha van ultrahangos elszívó modul.

3. Kézi, félautomata és teljesen automata?
Ez a munkaerőköltség és a munkahatékonyság problémája.Jelenleg az állatkórházak, ahol nincs elegendő személyzet, és a nukleinsav-kinyerés és kimutatás bizonyos készségeket és tapasztalatot igénylő munka.Kétségtelen, hogy a teljesen automatikus nukleinsav extrakciós és detektáló gép a tökéletes választás.

4. Állandó hőmérséklet-erősítés vagy változó hőmérsékletű erősítés?
Az amplifikációs reakció egy nukleinsav-detektáló kapcsolat, és az ehhez kapcsolódó professzionális technológia összetett.Durván szólva, enzimeket használnak a nukleinsav amplifikálására.Az erősítési folyamat során az erősített fluoreszcencia jelet vagy a beágyazott fluoreszcencia jelet észleli.Általánosságban elmondható, hogy minél korábban jelenik meg a fluoreszcencia jel, annál nagyobb a minta célgén tartalma.

Az állandó hőmérsékletű amplifikáció egy fix hőmérsékletű nukleinsav-amplifikáció, míg a változó hőmérsékletű amplifikáció ciklikus amplifikáció, szigorúan a denaturáció-illesztés-kiterjesztés szerint.Az állandó hőmérsékletű erősítési időt hajtottuk végre, míg a változó hőmérsékletű erősítési időt nagyban befolyásolja a műszer hőmérsékletének emelkedésének és csökkenésének sebessége (jelenleg sok gyártó képes 40 erősítési ciklust végrehajtani körülbelül 30 perc alatt).

Ha a laboratóriumi körülmények jók és a zónázás szigorú, akkor indokolt azt mondani, hogy a kettő közötti pontossági különbség nem lesz nagy.A változó hőmérsékletű amplifikáció azonban több nukleinsavterméket szintetizál viszonylag rövidebb idő alatt.Szigorú zónázás és professzionális képzés nélküli laboratóriumokban nagyobb a nukleinsav-aeroszol szivárgásának kockázata, a téves pozitív eredmény a szivárgás megtörténte után következik be, és ezt rendkívül nehéz kiküszöbölni.

Ezenkívül az állandó hőmérsékletű amplifikáció hajlamosabb a nem specifikus amplifikációra is, ha a minta összetett (a relatív reakcióhőmérséklet alacsonyabb, és minél magasabb a kiterjesztési hőmérséklet, annál jobb a primer kötési specifitása).

Ami a jelenlegi technológiát illeti, a változó hőmérsékletű erősítés megbízhatóbb.

5. Hogyan lehet elkerülni a nukleinsav-amplifikációs termékek kiszivárgását?
Jelenleg sok gyártó a mirigy típusú PCR csövet választja nukleinsav reakciócsőként, amely súrlódással van lezárva, és a változó hőmérsékletű denaturáció hőmérsékleti denaturációja a változó hőmérsékletű PCR amplifikációban eléri a 90 fokot.
Celsius fok.A hővel történő tágulás és a hideggel történő összehúzódás ismételt folyamata nagy kihívást jelent a PCR cső tömítésére, és a tömszelence típusú PCR cső viszonylag könnyen okoz szivárgást.

A reakciótermék szivárgásának elkerülése érdekében célszerű teljesen lezárt készlettel/csővel végrehajtani a reakciót.Tökéletes lenne, ha ki lehetne dolgozni egy teljesen lezárt készletet a nukleinsavak kivonására és kimutatására.

Tehát a New Tech új, teljesen automatikus nukleinsav extrakciós és detektáló gépe a fenti öt optimális választással rendelkezik.